脂氧素A4(LXA4)酶聯免疫吸附測定試劑盒:
脂氧素A4(LXA4)酶聯免疫吸附測定試劑盒:1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜;
2.次日洗滌3次;
3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌;
4.(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml;
5.37℃孵育35-60分鐘,洗滌;
6.’最后一遍用DDW洗滌。
其余步驟同“雙抗體夾心法"的4、5、6。
發(fā)展前景
臨床測定技術的發(fā)展主要在于方法學的發(fā)展,而方法學的發(fā)展依托于試劑生產技術不斷進步更新和型標記物的應用。分子生物學正在并最終肯定會讓對整個生命科學有一個全面而*的認識,其對免疫測定技術發(fā)展的影響也是直接而又有效的,對以前一些難以檢測的生物活性物質的測定,并且大大提高了檢測的靈敏度和特異性。
主要設備
試劑
(1) 包被緩沖液(PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液):
Na2CO3 1.59克
NaHCO3 2.93克
加蒸餾水至1000ml
(2) 洗滌緩沖液(PH7.4PBS):0.15M
KH2PO4 0.2克
Na2HPO4·12H2O 2.9克
NaCl 8.0克
KCl 0.2克
Tween-20 0.05% 0.5ml
加蒸餾水至1000ml
(3) 稀釋液:
牛血清白蛋白(BSA) 0.1克
加洗滌緩沖液至100ml
或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5~10%使用。
(4) 終止液(3M H2SO4):
蒸餾水178.3ml,逐滴加入濃硫酸(98%)21.7ml。
(5) 底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):
0.2MNa2HPO4(28.4克/L)25.7ml
0.1M檸檬酸(19.2克/L) 24.3ml
加蒸餾水50ml。
(6) TMB(四甲基聯苯胺)使用液:
TMB(10mg/5ml無水乙醇)0.5ml
底物緩沖液(PH5.5) 10ml
0.75%H2O2 32μl
(7) ABTS使用液:
ABTS 0.5mg
底物緩沖液(PH5.5) 1ml
3%H2O2 2μl
(8) 抗原、抗體和酶標記抗體。
(9) 正常人血清和陽性對照血清。
器材
(1) 聚苯乙烯塑料板(簡稱酶標板)40孔或96孔,ELISA檢測儀,50μl及100μl加樣器,塑料滴頭,小毛巾,洗滌瓶。
(2) 小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等。
(3) 4℃冰箱,37℃孵育箱。